Bicinchoninic acid (BCA )法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。

免疫组化abc法的原理_免疫组化abc法名词解释

什么是免疫组化?

问题一：免疫组化是什么意思 免疫组化就是看看癌肿细胞是什么类型的。因为不同类型肿瘤对放化疗敏感程度不同。

问题二：什么是免疫组化检查 免疫组化是免疫组织化学方法的简称。临床上的免疫组化检查是指应用免疫学基本原理――抗原与抗体特异性结合，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，从而确定组织细胞内的抗原（多肽和蛋白质），并对其进行定位、定性及定量。

乳腺癌诊断过程中的免疫组化检查就是指应用上述免疫组化技术来检测乳腺癌组织细胞中的某些特定蛋白质。这些蛋白质的存在与否，不仅有助于确定肿瘤是哪种类型，还能够为临床医师提供乳腺癌分子分型的重要依据。这些免疫组化的检测结果反映了乳腺癌的生物学特点，具有非常重要的预测预后意义与指导治疗的价值。每一位患者的肿瘤乃至同一肿瘤的不同部分，其免疫组化的表达可能都不同。因此，乳腺癌的治疗方案不是人人相同，做免疫组化检查正是为了了解肿瘤是否具备某些特性，用以针对性地制订治疗方案，以达到最好的治疗效果。免疫组化检查结果也是评估患者复发转移风险的重要指标之一，临床医师根据这些结果综合判断手术后的后续治疗是否需要化疗、内分泌治疗或靶向治疗。如果需要化疗，那么什么药、怎么用药、用几个疗程等等问题。都需要参考包括免疫组化报告在内的各项指标来确定。因此，临床医师在制订治疗方案之前需要阅读免疫组化报告。

问题三：做免疫组化的意思是什么？ 免疫组织化学（Immunohistochemistry）又称免疫细胞化学它 是组织化学的分支它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术故其准确性比较高免疫组化是根据阳性的指标来诊断肿瘤的免疫组化比起镜检诊断更加准确客观您上面有CK（++）CK10（+++） Vim(+++) 这三项是阳性如果取自肾脏约两公分的包块说明可能与肾脏有关但这个要由病理科医生来诊断

问题四：什么是免疫组化 免疫组化，是应用免疫学基本原理――抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

问题五：免疫组化结果是什么意思 p16基肿瘤抑制基p16基发突变缺失导致细胞异增殖终形肿瘤该病p16基阳性提示系恶性肿瘤 p53基抑癌基物体内种抑制细胞转变癌细胞基功能降癌症能发 Ki-67作细胞增殖标记物病理报告指数高低与许肿瘤化程度、浸润、转移及预密切相关数值越高恶性程度越高 CerbB-2基种原癌基该病阴性需用赫赛汀 TOP2A基阳性提示细胞增殖S期晚期G2/M期表达增加提示蒽环类药物化疗效（表阿霉素）制定化疗案参考用 ER/PR别雌激素受体孕激素受体提示否需要内泌治疗该病应该做内泌治疗 CK56种基底细胞角蛋白鳞状皮发层细胞、肌皮细胞、间皮细胞阳性腺皮细胞阴性 p40腺癌阳性率

问题六：什么叫免疫组化？ 什么叫免疫组化。 请问是免疫组织化学法，或者是免疫组织化学技术的简写吗？

问题七：免疫组化是什么意思 免疫组化是目前临床上常用的病理学检测方法，多用于鉴别形态很相似的疾病或肿瘤，确定组织来源及研究肿瘤组织代谢改变，它包括细胞内酶学的变化、糖原的变化、核酸的变化。您的免疫组化检查结果可能是为了检测是否患有恶性淋巴瘤，淋巴细胞反应性增生可能是最后的诊断结果，即在某种因素的 *** 下诱发了淋巴细胞的增生；也可能是淋巴瘤引发的。前者是一个良性的过程，而后者则是恶性疾病。所以，针对您的具体情况应作具体分析。也可以密切观察病情变化。

问题八：免疫组化是什么意思 应用免疫学基本原理――抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

问题九：免疫组化是什么意思 免疫组化就是看看癌肿细胞是什么类型的。因为不同类型肿瘤对放化疗敏感程度不同。

问题十：什么是免疫组化检查 免疫组化是免疫组织化学方法的简称。临床上的免疫组化检查是指应用免疫学基本原理――抗原与抗体特异性结合，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，从而确定组织细胞内的抗原（多肽和蛋白质），并对其进行定位、定性及定量。

乳腺癌诊断过程中的免疫组化检查就是指应用上述免疫组化技术来检测乳腺癌组织细胞中的某些特定蛋白质。这些蛋白质的存在与否，不仅有助于确定肿瘤是哪种类型，还能够为临床医师提供乳腺癌分子分型的重要依据。这些免疫组化的检测结果反映了乳腺癌的生物学特点，具有非常重要的预测预后意义与指导治疗的价值。每一位患者的肿瘤乃至同一肿瘤的不同部分，其免疫组化的表达可能都不同。因此，乳腺癌的治疗方案不是人人相同，做免疫组化检查正是为了了解肿瘤是否具备某些特性，用以针对性地制订治疗方案，以达到最好的治疗效果。免疫组化检查结果也是评估患者复发转移风险的重要指标之一，临床医师根据这些结果综合判断手术后的后续治疗是否需要化疗、内分泌治疗或靶向治疗。如果需要化疗，那么什么药、怎么用药、用几个疗程等等问题。都需要参考包括免疫组化报告在内的各项指标来确定。因此，临床医师在制订治疗方案之前需要阅读免疫组化报告。

在免疫组化SABC法中，DAB显色是做什么用的？为什么用？原理是什么？DAB试剂盒是做什么用的？

DAB是显色剂，有毒，所以操作是最好带口罩和手套。它主要和蛋白质的NH2或SH基团结合，形成稳定的nn键或ns键，然后DAB中的显色基团就能显示出颜色，标记到已经暴露的蛋白质上，从而显示我们目标细胞的蛋白质分布及种类等。试剂盒的成分根据各个公司有所不同，但一般包括DAB原液，稀释剂和信号放大剂

什么是免疫组织化学？以ABC为例介绍免疫组织化学染色的步骤及在染色过程中应该注意的问题

免疫组化就是通过免疫反应来验证组织中是否存在某个蛋白。A是待检测的蛋白，也就是抗原，B就是一抗，只会和A发生反应，C就是二抗，只会和B反应，C通常会携带某种标记，比如说荧光，用于检测。

结果就是有A，B就能结合上，有AB，C就能结合上，通过检测C是否存在就可以知道A是否存在。

免疫组化原理

免疫组化染色是用一抗与被检测组织中目的蛋白抗原结合，然后用HRP等标记的二抗与一抗进行结合，最后通过与DAB显色剂反应，进而确认所要检测蛋白抗原的定位、半定量等目的。

免疫组化更多的意义在于查看目的蛋白的定位。定量一般用western来实现。

免疫组化染色和HE染色的不同之处可能是HE染色比较粗略地辨认不同细胞形态学改变；而后者能够针对特异性细胞标志物来检测特异性细胞的改变（数量）、也可检测细胞内细胞因子的转位，组织中一些特异性蛋白的表达的量改变（通过图像分析系统分析颜色深浅、分布的面积等综合分析）。

通俗的讲，HE仅仅是看大体病理改变，比如组织坏死，比如炎性渗出。免疫组化，看你的目的蛋白的表达情况。

免疫组化和****HE****染色的对比

DAB和HE一样也是一种染色剂，HE染色相对简单，能分辨出细胞中的嗜酸嗜碱性物质；DAB染色全称应该叫做免疫组化DAB染色，经过一系列复杂的生化反应后，DAB(二氨基联苯胺)染色剂能将辣根过氧化物酶染成棕色。

常用的免疫组化染色方法:

组化用HRP的话，信号不够强。通常用生物素标记HRP来增强信号。

1、 ABC法（卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法）

ABC法是利用卵白素与生物素特有的高度亲和力特性，与生物素化二抗结合，形成抗原＋特异性抗体＋生物素化二抗＋卵白素＋生物素＋HRP复合物，最后DAB显色。

复合物配制：先将生物素与酶结合，形成生物素化HRP，以生物素化HRP与卵白素按一定比例混合，形成卵白素-生物素-过氧化物酶复合物。

2、 SP法（抗生物素蛋白链酶素-过氧化物酶复合物）

本身没有连接生物素，但有两个生物素亲和力极高的结合位点，可以与二抗上的生物素结合，敏感性高，复合物不需要使用前混合，更为简便。

3、 PAP法

4、 直接法

样本制备

免疫组化结果分析

免疫组化结果的判断原则：

1 、必须设阳性对照和阴性对照。

2 、 抗原表达必须在特定部位。

3 、 阴性结果不能视为抗原不表达。

免疫组化染色实验组与对照组结果分析表

从表可以看出只有6、7实验结果有意义。1-5均因对照组的结果已否定Ab的特异性或IHC技术操作存在错误等而使实验结果失去意义，必须重复实验或换用Ab。

染色失败的几种情况及原因:

1、 所染的全部切片均为阴性结果，包括阳性对照在内。

2、 所有切片均呈阳性反应。

3、 所有切片背景过深。

4、 阳性对照染色良好，检测的阳性标本呈阴性反应。

所有切片呈阳性反应，其原因:

1、 切片在染色过程中抗体过浓，或干片了。

2、 缓冲液配置中未加氯化纳和PH值不准确， 洗涤不彻底。

3、 使用已变色的呈色底物溶液，或呈色反 应时间过长。

4、 抗体温育的时间过长。

5、 H 2 O 2 浓度过高，呈色速度过快且粘附剂太厚。

所有切片背景过深，其原因:

1、 内源性过氧化酶没有完全阻断。

2、 切片或涂片过厚。

3、 漂洗不够。

4、 底物呈色反应过久。

5、 蛋白质封闭不够或所用血清溶血。

6 、使用全血清抗体稀释不够。

阳性对照染色良好，检测的阳性标本呈阴性反应。

最常见的原因:标本固定和处理不当。

注意事项：

1、 苏木素复染时间需要摸索，尤其要考虑阳性染色的位置。

2、 切片脱蜡和水化要充分；加反应液时要覆盖组织充分；每次加液前甩干洗涤液，但又防止干片。

3、 以下原因可能导致片子着色不均匀：

①脱蜡不充分。可以60℃烤20min，立即放入新鲜的二甲苯中。

②水化不全。应经常配制新鲜的梯度乙醇。

③抗体没混匀。用移液器充分混匀一抗/二抗等试剂。④抗体孵育时，切片放倾斜。

⑤抗体孵育后PBS冲洗不充分。

⑥制片厚薄不均匀等问题。

⑦染片盒不平，切片倾斜。

4、 一抗的清洗:

1、单独冲洗，防止交叉反应造成污染。

2、温柔冲洗，防止切片的脱落，推荐用浸洗方式。

3、冲洗的时间要足够，才能彻底洗去 结合的物质。

5、 PBS的PH和离子强度的使用：

1、建议PH在7.4-7.6浓度是0.01 M。

2、中性及弱硷性条件（PH7-8）有利 于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利 于分解。

6、 拍照：

1、有条件的话应该立即拍照，若不能及时拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和湿度。

以下几个情况需要做免疫组化： 恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；

确定转移性恶性肿瘤的原发部位；

对某类肿瘤进行进一步的病理分型；

软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；

发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定；

为临床提供治疗方案的选择。

【免疫组化的定义】：

免疫组化，是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术（immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（immunocytochemistry）。

【免疫组化的基本原理】

抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。

ABC法：辣根过氧化物酶是标记在生物素上，再把生物素与亲和素结合（亲和素上有四个生物素结合位点）

LSAB法：辣根过氧化物酶是直接标记在亲和素上的。理论上LSAB法比ABC法敏感性强些

这两种方法的区别就是酶标记的地方不同，其实实验中效果差不太多，都可以用