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反相高效液相色谱洗脱顺序(反相高效液相色谱的工作原理)

1、洗脱能力强后出柱，正相液液分配色谱的洗脱顺序为极性弱的组分先被洗脱，极性强的组分后被洗脱。

2、反相分配色谱的洗脱顺序与此相反，极性强的组分先出柱，极性弱的组分后出柱。

3、柱色谱中固定相极性大于流动相的色谱为正相色谱，相反的为反相色谱。

4、根据相似相溶原理：混合物中在固定相中溶解度大的物质后出柱，保留时间长，难被洗脱。

5、通常按洗脱剂洗脱能力大小递增变换洗脱剂的品种和比例，分别分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少或不再含有时，再改变洗脱剂的品种和比例。

6、操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。

7、洗脱剂的注意事项装柱前，先将载体和固定液混合，然后分次移入色谱柱中并用带有平面的玻棒压紧；供试品可溶于固定液，混以少量载体，加在预制好的色谱柱上端。

8、洗脱剂需先加固定液混合使之饱和，以避免洗脱过程中两相分配的改变。

9、样品在色谱柱中的移动速度和分离效果取决于吸附剂对样品各组分的吸附能力大小和洗脱剂对各组分的解吸能力大小，因此，吸附剂的选择和洗脱剂的选择常常是结合起来进行的。

10、首先，根据待分离物质的分子结构和性质，结合各种吸附剂的特性，初步选择一种吸附剂。

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